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| 產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號 | BK-P64676 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
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腸道沙門氏菌染料法熒光定量PCR試劑盒 |
50次 |
BK-P64676 |
實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
FCGR3B Others Human 人 CD16b / FCGR3B CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Pentadecanoicacid十五酸1克生物技術(shù)級，98%
EndoFectagen? 內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒對亞磺酸鈉 p-sulfinate,95% 824-79-3 25G 通用試劑
牛陀螺狀細(xì)胞;BT 雞瘤細(xì)胞，DT40細(xì)胞 Kert-3細(xì)胞，小鼠細(xì)胞呋(*) Furcn
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞(傣族);KM9403超氧化物歧化酶(抽取法)測試盒shēng huà shì jì容量：50塊/箱
FABP4 Others Mouse 小鼠 FABP4 / ALBP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (易-3)¤;阿西通;臘酮;兒價酮;2-4-pnopenone
內(nèi)臟脂肪細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)脫氫吲達(dá)帕胺Dehydro
Indapamide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
TFPI2 Others Mouse 小鼠 TFPI2 / PP5 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) CHPS-Na；3-氯-2-羥基丙磺酸鈉CHPS-Na質(zhì)量規(guī)格：>98.5%
大鼠主動脈平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLSBES；2-溴乙基磺酸鈉 2-bromoethanesulphonate質(zhì)量規(guī)格：>98.5%
293-L.P.胚腎細(xì)胞 Human embryonic kidney cell line 293-L.P. MEM+10% FBSBICINE；N,N-二羥乙基甘氨酸BICINE質(zhì)量規(guī)格：>99%
IFNG Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 IFNG / Ierferon Gamma 蛋白BES salt; N,N-二(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸鈉BES Salt質(zhì)量規(guī)格：>99%
小鼠T細(xì)胞瘤細(xì)胞;Cyc-Tag(S49)司帕沙星Sparfloxacin質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
CD40 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CD40 / TNFRSF5 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 司帕沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）Sparfloxacin質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
U251細(xì)胞 Human glioma cell line U251 DMEM+10% FBS氟喹酮Afloqualone質(zhì)量規(guī)格：>98%
U251細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞 滑假絲酵母 海馬趾神經(jīng)元RNAHN-h miRNA5 μg氟喹酮(標(biāo)準(zhǔn)品)Afloqualone質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
RT4(膀胱移行細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2磺胺醋酰鈉 SA-NASufacetamide 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
NRK-52E，大鼠腎細(xì)胞丁香酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Syringic acid質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KM932 人臍動脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL東莨菪苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Scopolin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
人脈絡(luò)叢內(nèi)皮細(xì)胞RNAHCPEC miRNA5 μg東莨菪內(nèi)酯Scopoletin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
IL23 Others Marmoset 狨猴 IL23A & IL12B Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 冬凌草甲素(標(biāo)準(zhǔn)品)Oridonin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
犬腎細(xì)胞;MDCK(NBL-2)豆腐果苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Helicid質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
腸道沙門氏菌染料法熒光定量PCR試劑盒本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
