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| 產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號 | BK-P64622 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
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諾如病毒G1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 |
50次 |
BK-P64622 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
正常大鼠腎細(xì)胞(EGF受體陽性);NRK49F伊洛馬司他(GM6001)Ilomastat,GM6001,Galardin質(zhì)量規(guī)格：>98%,MMP(基質(zhì)金屬蛋白酶)抑制劑
CSF1R Others Human CSF1R / MCSF Receptor / CD115 (aa 543-922) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 愈創(chuàng)木酚縮水甘油 Guaiacol glycidyl ether質(zhì)量規(guī)格：>98%
T-105AIII型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mL4-氨基安替比林4-Aminoantipyrine質(zhì)量規(guī)格：AR,分析
SK-MEL-1, 皮膚色素瘤細(xì)胞 細(xì)胞,CEM細(xì)胞 SW579(細(xì)胞)N-溴代丁二(NBS)N-bromosuccinimide質(zhì)量規(guī)格：AR
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;MEF溶葡球菌酶,溶葡萄球菌酶 Lysostaphin質(zhì)量規(guī)格：BR,5000U/Pack
Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)左西孟坦Levosimendan質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
GPR114 Others Human GPR114 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 利奈唑酮-d3Linezolid-d3質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
大鼠破骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL13X分子篩(60-80目,氣相、液相色譜柱)Molecular sieves Type 13X質(zhì)量規(guī)格：60-80目,氣相、液相色譜柱
AZ-521細(xì)胞 Human gasic cancer cells AZ-521 MEM+10% FBS13X分子篩(80-100目,氣相、液相色譜柱)Molecular sieves Type 13X質(zhì)量規(guī)格：80-100目,氣相、液相色譜柱
IFNA13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IFNA13 / Ierferon alpha-13 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)13X分子篩(40-60目,氣相、液相色譜柱)Molecular sieves Type 13X質(zhì)量規(guī)格：40-60目,氣相、液相色譜柱
整合SV40基因的上皮細(xì)胞;HBL-100 [HBL100]鈮標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)Niobium standard質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml
DNASE1 Others Human DNASE1 / Deoxyribonuclease I / DNL1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鎳標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/mL，基體:1%HNO3)Nickel Standard質(zhì)量規(guī)格：100μg/mL，基體:1%HNO3
CL-0384MDA-MB-468-06(癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑：水)Potassium standard質(zhì)量規(guī)格：500mg/L,溶劑：水
Mv1Lu細(xì)胞，貂肺上皮細(xì)胞 紅白細(xì)胞細(xì)胞,HEL細(xì)胞 皮膚成纖維細(xì)胞;HSAS4鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/mL,基體:1%HCl) Potassium Solution質(zhì)量規(guī)格：1000μg/mL,基體:1%HCl
鯉魚尾鰭細(xì)胞;YZ16鐠標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)Praseodymium standard質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml
海馬趾神經(jīng)細(xì)胞cDNAHN-h cDNA吡羅昔康-d3Piroxicam-d3質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
PRKAR1A Others Human PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 泊沙康唑-d4Posaconazole-d4質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
T739小鼠肺腺株;LA795利福昔明標(biāo)記d6Riimin - Labeled d6質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
HCCC-9810細(xì)胞，亞力山大細(xì)胞 APP-PS1(C410Y)雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,7WCY1.0細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-E2羅匹尼羅N-氧化物Ropinirole N-Oxide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
Lec1(倉鼠卵巢細(xì)胞) 5×106cells/瓶×23-氧羅匹尼羅鹽酸鹽3-Oxo Ropinirole 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative
real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
諾如病毒G1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR
